肝移植仍受供體器官短缺和手術(shù)本身風(fēng)險的限制，這凸顯了開(kāi)發(fā)新型肝硬化療法的迫切需求。本研究開(kāi)發(fā)了一種將人原代肝細胞轉化為可擴增的肝細胞衍生肝祖細胞樣細胞（HepLPCs）的方案，這些細胞能夠分泌高水平的基質(zhì)金屬蛋白酶和肝細胞生長(cháng)因子。

上海仁濟醫院牽頭研究：肝祖細胞治療肝硬化6個(gè)月后，8例患者肝功能、凝血及纖維化指標顯著(zhù)改善

近日，上海交通大學(xué)醫學(xué)院附屬仁濟醫院的多個(gè)科室聯(lián)合中國上海海軍軍醫大學(xué)東方肝膽外科醫院臨床檢驗科、德國漢諾威醫學(xué)院等研究機構在《Cell Discovery》上發(fā)表了一項肝祖細胞治療針對9名肝硬化患者的首次人體臨床試驗結果[1]。

研究結果表明，經(jīng)肝動(dòng)脈輸注HepLPCs安全可行，且在6個(gè)月隨訪(fǎng)期內，8名完成隨訪(fǎng)的患者在肝臟生化、凝血功能及門(mén)靜脈高壓等多個(gè)關(guān)鍵指標上表現出顯著(zhù)改善，為肝硬化治療提供了一種極具前景的新策略。

一、引言：肝硬化的治療挑戰與細胞治療新方向

肝硬化是一種嚴重的慢性肝臟疾病，其特征是肝臟進(jìn)行性瘢痕形成和功能損害，最終導致代謝、解毒及合成等關(guān)鍵功能的喪失。常見(jiàn)病因包括病毒性肝炎、酒精中毒及非酒精性脂肪肝等。肝移植雖是根治手段，卻面臨供體短缺、手術(shù)風(fēng)險高和免疫排斥等挑戰，使得開(kāi)發(fā)替代療法成為當務(wù)之急。

細胞移植是近年來(lái)備受關(guān)注的新策略。其中，胎肝細胞移植雖顯示出潛力，但受限于倫理與實(shí)際操作問(wèn)題。近期研究表明，通過(guò)化學(xué)重編程可將成熟肝細胞轉化為增殖性肝祖細胞樣細胞（HepLPCs），這些細胞與胎肝細胞具有相似的基因表達譜，在促進(jìn)肝臟再生方面展現前景，但其對肝硬化的具體治療效果仍需深入驗證。

為此，本研究成功通過(guò)化學(xué)重編程將人原代肝細胞轉化為可擴增的肝祖細胞（HepLPCs）。在培養過(guò)程中，這些細胞能夠分泌促進(jìn)肝臟再生并抑制纖維化的因子；在肝硬化大鼠模型中，HepLPCs展現出明顯的抗纖維化作用與再生潛力。

毒理學(xué)風(fēng)險評估完成后，一項納入9名肝硬化患者的臨床研究進(jìn)一步驗證了HepLPCs在治療肝硬化方面的安全性及潛在療效。臨床前及臨床研究的綜合數據共同表明，HepLPCs具備良好的安全性及治療前景，因此有望為解決肝硬化患者尚未滿(mǎn)足的臨床需求提供潛在突破。

二、如何生產(chǎn)出符合良好生產(chǎn)規范（GMP）和質(zhì)量保證的HepLPC？

為確保臨床應用的安全性與一致性，本研究在良好生產(chǎn)規范（GMP）條件下生產(chǎn)HepLPCs（圖1）。

標準化的培養體系：使用人原代肝細胞作為起始材料，在成分明確的無(wú)動(dòng)物源性培養基中進(jìn)行化學(xué)重編程，確保了生產(chǎn)過(guò)程的標準化。

全過(guò)程質(zhì)量控制：建立了雙層細胞庫系統，并制定了嚴格的放行標準，對細胞進(jìn)行特性、無(wú)菌性和安全性評估，保證最終產(chǎn)品符合預定義規格。

細胞特性與安全性驗證：核型分析和全基因組測序證實(shí)了細胞的基因組穩定性。流式細胞術(shù)分析顯示，HepLPCs同時(shí)表達肝臟特異性基因與干細胞/祖細胞基因，且不表達MHC II類(lèi)抗原，具備低免疫原性。

功能效力確認：轉錄組學(xué)與功能實(shí)驗證實(shí)，HepLPCs能高效分泌肝細胞生長(cháng)因子（HGF）和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），在功能層面具備促進(jìn)肝臟再生與抑制纖維化的雙重潛力。

三、臨床前研究：HepLPCs在大鼠模型中證實(shí)其療效與安全性

治療效果方面，在由硫代乙酰胺誘導的晚期肝硬化大鼠模型中，經(jīng)門(mén)靜脈移植人源HepLPCs顯示出顯著(zhù)的治療益處。與陰性對照組相比，HepLPCs治療組大鼠的肝臟纖維化程度得到明顯改善，具體表現為細胞外基質(zhì)的主要成分（如膠原蛋白Col1a1和纖連蛋白）的積累顯著(zhù)減少。這些免疫組化結果直接證實(shí)了HepLPCs具備減輕乃至逆轉肝纖維化的強大潛力（圖2）。

安全性與作用機制方面，整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中所有大鼠體重穩定且無(wú)死亡，證明了治療的安全性。值得注意的是，得益于HepLPCs本身低免疫原性的特性，移植過(guò)程無(wú)需使用免疫抑制劑。盡管血清ALT和AST水平的變化未達統計學(xué)意義，但其下降趨勢仍提示肝損傷有所改善。這些綜合結果有力地支持了HepLPCs移植作為一種安全且有效的策略，也為后續臨床研究提供了有力的可行性依據（圖3）。

四、臨床研究：HepLPC治療肝硬化患者的可行性和安全性

首先，在成功建立符合GMP規范的生產(chǎn)流程并證實(shí)其臨床前療效的基礎上，研究人員啟動(dòng)了一項針對肝硬化患者的單臂、開(kāi)放標簽臨床試驗，旨在評估HepLPCs療法在人體內的可行性與安全性。

該研究在2021年12月27日至2022年12月14日期間，共招募并篩選了14例病因各異的肝硬化患者。其中9例患者接受了經(jīng)肝動(dòng)脈輸注HepLPCs的治療，劑量遞增：低劑量組（0.3–0.4×10?/kg）、中劑量組（1.5–2.0×10?/kg）和高劑量組（3.0–4.0×10?/kg）（圖4、5a）。

a.根據修改后的方案繪制的研究設計示意圖。b.患者處置和分配到隊列及分析集的示意圖。

a.HepLPC輸注途徑示意圖。b.HepLPC治療患者血清中CRP、IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-10和TNF-α水平。2號患者出現流感樣癥狀，并伴有短暫的CRP水平升高。虛線(xiàn)代表正常值。c.HepLPC治療前后AFP水平的評估。

在整個(gè)治療過(guò)程中，得益于臨床前研究已證實(shí)的HepLPCs低免疫原性特性，所有接受治療的患者均未使用免疫抑制劑，且未觀(guān)察到任何免疫排斥或炎癥反應。尤為重要的是，治療期間所有患者均未出現急性輸血反應或劑量限制性毒性，初步證明了該療法在肝硬化患者中應用的良好安全性與耐受性。

HepLPCs治療肝硬化卓越的安全性

HepLPCs治療展現出卓越的安全性，主要體現在三個(gè)方面：

1. 嚴重不良事件與治療無(wú)關(guān)，且治療前期已顯現安全性信號：研究中唯一一例嚴重不良事件（急性膽囊炎導致的肝移植）被證實(shí)與HepLPC治療本身無(wú)關(guān)。

這一判斷的關(guān)鍵依據在于：輸注的細胞在體內存留時(shí)間短暫，且在該事件發(fā)生前（治療后1個(gè)月），該患者的多項關(guān)鍵肝功能指標（如血氨、凝血功能、前白蛋白等）已顯示出改善趨勢。這一方面排除了治療的直接責任，另一方面反而凸顯了細胞輸注初期的良好耐受性和潛在益處，強化了其安全性 。

2. 不良事件輕微可控，且未引發(fā)免疫或炎癥風(fēng)暴：研究期間記錄的其他不良事件（如便秘、瘙癢等）均為常見(jiàn)臨床癥狀，被評估與HepLPC或其輸注方式無(wú)關(guān)，且患者耐受良好。

更重要的是，通過(guò)對血清細胞因子（包括CRP、IL-6等）的密切監測，證實(shí)所有患者均未發(fā)生細胞因子釋放綜合征等嚴重的免疫炎癥反應。多數患者IL-6水平在治療后甚至有所下降，這從免疫學(xué)角度提供了強有力的證據，表明該療法即使在不使用免疫抑制劑的情況下，也具有卓越的免疫兼容性和炎癥安全性。

3. 無(wú)血液學(xué)毒性或腫瘤發(fā)生風(fēng)險，顯示出長(cháng)期的生物安全性：治療未導致血細胞下降，反而改善了貧血狀況。全程監測未發(fā)現甲胎蛋白（AFP）水平升高或肝臟腫瘤跡象，排除了長(cháng)期風(fēng)險。

顯著(zhù)的治療效果：肝功能、凝血、纖維化及影像學(xué)改善

1. 肝功能與合成功能顯著(zhù)改善：治療后，患者的整體肝功能得到有效恢復。具體表現為：37.5%（3/8）的患者終末期肝病模型（MELD）和Child-Pugh評分下降，其中一名重癥患者甚至因此從肝移植等待名單中被移除。更為普遍的是，75%（6/8）的患者血清白蛋白（ALB）和前白蛋白（pre-ALB）水平升高，直接證明了肝臟合成蛋白質(zhì)的功能增強。同時(shí)，所有患者的血清氨水平均持續改善，表明肝臟的解毒能力也得到了有效恢復（圖6）。

2. 凝血功能全面恢復：評估凝血功能的多個(gè)關(guān)鍵參數均顯示出積極變化。其中，62.5%（5/8）患者的凝血酶原時(shí)間（PT）縮短，而87.5%（7/8）患者的活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）下降，這表明機體的凝血機制趨于正常。此外，62.5%（5/8）患者的纖維蛋白原水平顯著(zhù)升高，進(jìn)一步印證了肝臟合成凝血因子的能力在治療后得到了有效增強。

3. 肝纖維化與硬度呈現逆轉趨勢：通過(guò)直接和間接的測量方法，均觀(guān)察到肝纖維化的緩解。在影像學(xué)上，50%（4/8）的患者通過(guò)彈性成像檢測的肝臟硬度值（LSM）出現下降。在血清學(xué)指標上，尤其是低劑量組的輕度肝硬化患者，其透明質(zhì)酸（HA）等肝纖維化標志物水平顯著(zhù)且持續降低。這些數據共同表明，HepLPC治療對逆轉肝臟的纖維化病理改變具有積極影響。

4. 門(mén)靜脈高壓顯著(zhù)緩解與肝臟再生跡象：影像學(xué)檢查（如彈性成像和磁共振）提供了治療有效的有力結構證據。75%（6/8）的患者觀(guān)察到脾臟體積縮小，這是門(mén)靜脈高壓得到改善的直接標志。尤為重要的是，有患者的下段食管靜脈曲張血管直徑減小，證實(shí)了門(mén)體分流的減少。此外，同樣有75%（6/8）的患者肝臟體積出現增大，這強烈提示肝細胞可能發(fā)生了增殖，為HepLPs能夠促進(jìn)肝臟再生提供了關(guān)鍵的臨床證據。

討論與結論

低免疫原性賦予HepLPCs優(yōu)異的安全性：本研究證實(shí)，HepLPCs在臨床應用中具備出色的安全性。其所采用的細胞劑量與既往肝干細胞及間充質(zhì)干細胞治療研究相當，但在整個(gè)劑量范圍內均未出現治療相關(guān)不良事件或免疫毒性跡象。特別值得關(guān)注的是，在未使用免疫抑制劑的情況下，所有患者均未出現轉氨酶或炎癥細胞因子水平升高，這直接驗證了臨床前研究所揭示的低免疫原性特征——HepLPCs不表達MHC II類(lèi)抗原，并可抑制T細胞增殖與促炎因子表達，從而實(shí)現了無(wú)需免疫抑制支持的安全應用。

肝動(dòng)脈輸注途徑具備高安全性與細胞植入效率：在給藥途徑方面，本研究采用的經(jīng)肝動(dòng)脈輸注展現出明顯優(yōu)勢。相較于脾內移植或門(mén)靜脈輸注等傳統方式，肝動(dòng)脈途徑具有血流速度快、血栓風(fēng)險低、不受門(mén)靜脈高壓影響等特點(diǎn)，并能提供更高的細胞植入效率與持久性。臨床結果進(jìn)一步證實(shí)了該途徑的可靠性，研究期間所有患者均未發(fā)生出血或血栓事件，為此輸注方式的未來(lái)應用提供了有力的安全性依據。

肝功能改善提示旁分泌機制主導治療效應：盡管在組織學(xué)層面尚未觀(guān)察到肝硬化逆轉的直接證據，但HepLPC治療確實(shí)帶來(lái)了多項關(guān)鍵肝功能指標的顯著(zhù)改善。患者的前白蛋白、凝血功能等合成指標迅速提升，解毒能力增強，門(mén)靜脈高壓相關(guān)臨床表現（如脾腫大、腹水）也得到緩解。尤為重要的是，這些療效在患者體內已檢測不到供體細胞的情況下依然持續存在，強烈提示HepLPCs主要通過(guò)旁分泌機制發(fā)揮作用，即通過(guò)分泌活性因子促進(jìn)宿主自身肝臟的再生與修復，從而實(shí)現疾病修飾效應。

總之，我們的研究表明，經(jīng)肝動(dòng)脈輸注肝硬化患者肝臟來(lái)源的肝細胞（HepLPCs）安全、可行，且可能有效治療肝硬化。這種新型治療方法在肝硬化的臨床治療中具有巨大的應用前景。

令人鼓舞的結果為推進(jìn)下一階段的臨床試驗提供了強有力的理論依據，并有望將該療法的應用范圍從肝硬化擴展到急性加重型慢性肝衰竭。

參考資料：

[1]He, K., Zhu, XJ., Shi, YP. et al. Treatment of liver cirrhosis using hepatocyte-derived liver progenitor-like cells: a prospective, open-label, single-arm, safety trial. Cell Discov 11, 88 (2025). https://doi.org/10.1038/s41421-025-00831-y

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